شناسایی مورفولوژیک و مولکولی عامل بوته میری خیار در رفسنجان

بیماری بوته میری خیار از جمله عوامل محدود کننده کشت خیار که باعث خسارت قابل توجهی در گلخانه های تجاری می شود. به منظور شناسایی عوامل بیماری زا، نمونه برداری و جداسازی عامل بیماری طی سال های ۱۳۸۸ تا ۱۳۹۰ از گلخانه های تجاری خیار در رفسنجان انجام شد. تعداد ۲۳ جدایه پیتیوم با استفاده از محیط کشت انتخابی جداسازی و بیماریزایی جدایه ها روی گیاهچه های خیار ارزیابی و اثبات گردید. شناسایی بیمارگر بر اساس ریخت شناسی پرگنه، ویژگی های میکروسکوپی و روش مولکولی انجام شد. بر اساس ویژگی های میکروسکوپی گونه P. aphanidermatumشناسایی گردید. توالی نوکلئوتیدی دی ان ای ناحیه ترانوبسی شونده داخلی ریبوزومی (rDNA-ITS) جدایه های انتخابی تعیین و به بانک ژن ارسال گردید.جستجوی تشابه با GenBank-BLAST با استفاده از توالی ناحیه rDNA-ITS نشان داد کهP. aphanidermatumثبت شده در بانک ژن با شماره ثبت AB۳۵۵۵۹۹ شبیه ترین توالی (بیش از۹۹درصد تشابه) به جدایه به دست آمده می باشد. شناسایی و ردیابی مولکولی P. aphanidermatum از بافت آلوده بر اساس تکثیر قطعه اختصاصی از ناحیه rDNA-ITS با استفاده از آغازگراختصاصی Paph۵۴F/ITS۲ انجام و اختصاصیت و حساسیت آغازگر بررسی شد. نتایج نشان داد که جفت آغازگر مزبور برای ردیابی بیمارگر P. aphanidermatum بسیار اختصاصی و قادر به تکثیر قطعه ۲۰۰ جفت بازی می باشد. از طرفی قادر به ردیابی کمتر از fg۲۰۰ از DNA خالص بیمارگر در PCR معمولی می باشد. استفاده از آغازگرطراحی شده زمینه ردیابی P. aphanidermatum از بافت، آلوده را فراهم می نماید و هیچ باندی در تکثیر با DNA به دست آمده از بافت خیار سالم دیده نمی شود.

کلیدواژه ها:

ردیابی مولکولی ، واکنش زنجیره ای پلیمراز ، استخراج دی. ان.ای ، توالی یابی