تعیین تعداد نسخهی ترانسژن در گیاهان تراریخت توتون با استفاده ازReal-time PCR

معمولاً، هدف از انتقال ژنهای خارجی به ژنوم یک گیاه، بیان حداکثری آن است. اما در گیاهان تغییر یافتهی ژنتیکی، ژنهای وارد شده ممکن است خاموش شده و بیان نگردند. تعداد نسخههای ترانسژن یکی از عوامل تأثیرگذار بر سطح بیان و ثبات ژن خارجی در گیاهانتراریخت بوده و تعیین تعداد نسخههای ترانسژن، یکی ازمهمترین اقدامات، پس از به دست آوردن گیاهان تراریخت است. گیاهان مورداستفاده در این تحقیق گیاهان توتون تراریخت شده با ژنهایnptII و IFNγ بودند که تراریزش این گیاهان به کمک روش اگروباکتریوم و با استفاده از پلاسمیدpBI121انجام شده بود. هدف ما، تعیین تعداد نسخههای ژنهایnptII و IFNγدر نسل دوم گیاهان توتون تراریخت بود که با استفاده از تکنیکReal-time PCRو ماده فلورسانسSYBR Green Iانجام شد. تعداد نسخهی ژنها در این مطالعه به کمک روش کمیت سنجی مطلق و رسم منحنی استاندارد تعیین گردید. نتایج نشان داد که تعداد نسخههای کمتری از ژنIFNγبه برخی ازگیاهان منتقل شده است. انتظار میرود گیاهانی که تعداد نسخه های پائینی از ژنIFNγرا نشان دادهاند، بیان پایدار و نسبتاً بالاتری از آن راداشته باشند، تا در نهایت بتوان از آنها جهت تولید پروتئین با ارزش اینترفرون گاما استفاده نمود

کلیدواژه ها:

توتون تراریخته ، تعداد نسخه ترانسژن ، real time PCR